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紫外可見近紅外分光光度計(jì)

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1、基本工作原理1)吸收的本質(zhì):分光光度法是利用物質(zhì)對(duì)不同波長光的選擇吸收特性而建立起來的分析方法

1、基本工作原理
1)吸收的本質(zhì):分光光度法是利用物質(zhì)對(duì)不同波長光的選擇吸收特性而建立起來的分析方法。通常利用棱鏡或光柵分光來取得單色光,使單色光連續(xù)地依次通過溶液,并測得該溶液對(duì)每一波長的吸收,得到吸收光譜曲線。吸收光譜來源于物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收,這是物質(zhì)的宏觀現(xiàn)象,而吸收的本質(zhì)
是分子內(nèi)部運(yùn)動(dòng)和光相互作用的結(jié)果。當(dāng)物質(zhì)的分子吸收一定能量或波長的光譜后,透過的光譜中有些波長被吸收就形成了吸收光譜。吸收的能量愈小,則相應(yīng)的光的波長,吸收峰出現(xiàn)在較長波段。當(dāng)吸收在紅外區(qū)時(shí)形成紅外吸收光譜,如果吸收能量愈大,則相應(yīng)的波長愈短,吸收峰出現(xiàn)在較短波段,當(dāng)吸收在紫外區(qū)產(chǎn)生紫外吸收光譜。

2)吸收定律—朗伯比耳定律:當(dāng)一束平行單色光通過均勻的溶液時(shí),其吸光度與溶液的濃度和厚度的乘積成正比。其數(shù)字表達(dá)式:A=KCL=LogI0/I=-LogT吸收定律數(shù)字表達(dá)式成立的前提:①,入射光為單色光,②,吸收過程中各物質(zhì)無相互作用,各物質(zhì)吸光度具有加和性,③,光與物質(zhì)的作用于吸收過程,沒有熒光散射和光化學(xué)現(xiàn)象,④,吸收物是一種均勻分布的連續(xù)體系,


3)影響分光光度法的原因:
a,輻射與物質(zhì)的非吸收作用引起的誤差,
b,熒光與光化學(xué)反應(yīng)的影響,一般說來,熒光對(duì)分光光度測量產(chǎn)生的誤差可以忽略,多數(shù)情況下顯色體系的熒光效率很小,而且熒光發(fā)射是各向同性,只
有一小部分沿著透射光方向進(jìn)入檢測器,使測量吸光度偏低,產(chǎn)生負(fù)偏離。熒光對(duì)吸收測量的影響極大程度上決定于儀器的吸收池和檢測器光學(xué)設(shè)計(jì),
c,反射和散射,吸收定律只適用于均勻介質(zhì)的吸收體系,渾濁溶液因散射使實(shí)測吸光度增加,導(dǎo)致偏離比耳定律,
d,儀器的非理想性引起的誤差,
e,復(fù)色光對(duì)比耳定律的偏離,大多數(shù)光度計(jì)只能獲得接近于單色光的狹窄的光通帶,實(shí)際上仍是有復(fù)色光性質(zhì),可導(dǎo)致偏離比耳定律。偏離的大小取決于二單色光的摩爾吸光系數(shù)差△ε,|△ε|很小時(shí),可近似認(rèn)為是單色光,在低濃度時(shí),工作曲線仍為直線,但濃度較大時(shí),隨濃度增大,A-C曲線彎曲愈嚴(yán)重,故比耳定律只適用于稀溶液,
f雜散光,雜散光是指進(jìn)入檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的不需要的其它波長組分。其主要來源于分光光度計(jì)色散元件棱鏡或光柵、反射鏡、透鏡表面的散射,單色器內(nèi)壁灰塵及其它元件傷痕的反射和漫射等,雜散光可引起嚴(yán)重的測量誤差。在儀器能量處于最小的波長處,雜散光通常處于值(如氘燈220nm,鎢燈340nm),
g,狹縫寬度,狹縫寬度不僅影響光譜的純度,也影響吸光度值。在定量分析時(shí),為了得到足夠的測量信號(hào),應(yīng)采用較大的狹縫,在定性分析時(shí)則采用較小的狹縫,當(dāng)出射狹縫和入射狹縫的寬度相等時(shí),狹縫寬度引起的誤差最小

h,波長標(biāo)度尺的誤差,波長標(biāo)度尺即儀器的波長準(zhǔn)確度,如誤差較大或未作校正,將光譜測量產(chǎn)生誤差,即影響吸光度測量的準(zhǔn)確度(在吸收光譜的尖峰處更為顯著)
i,不平行入射光的影響,比耳定律的前提條件之一是采用平行入射光束,以保證全部光束通過同一厚度的吸收介質(zhì),當(dāng)入射光束偏離平行性較大時(shí),就明顯導(dǎo)致偏離比耳定律。如果儀器中光束中等強(qiáng)度偏離平行性,引起的吸光度測量誤差一般在0.5%以內(nèi);
j,光度標(biāo)尺的誤差,光度標(biāo)尺即透射比準(zhǔn)確度,其誤差大小直接影響光度測量的準(zhǔn)確度。
2、性能指標(biāo)釋義
1)光學(xué)系統(tǒng):通常是指光學(xué)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)形式,目前,國內(nèi)光度計(jì)行業(yè)常采用的機(jī)構(gòu)為自準(zhǔn)式和CT式兩種結(jié)構(gòu);
2)波長范圍:指光度計(jì)所能進(jìn)行測試的波長值和最小值之差;
3)波長準(zhǔn)確度儀器顯示波長與真實(shí)波長的接近程度,即儀器設(shè)定波長與實(shí)際波長的差值。每臺(tái)光度計(jì)都要在很多個(gè)波長點(diǎn)檢查波長準(zhǔn)確度;波長準(zhǔn)確度是分光光度計(jì)的一項(xiàng)重要技術(shù)指標(biāo),它對(duì)定性、定量及結(jié)構(gòu)分析結(jié)果影響極大。
4)波長重復(fù)性:波長重復(fù)性是儀器返回原波長的能力。它體現(xiàn)了波長驅(qū)動(dòng)機(jī)械和整個(gè)儀器的穩(wěn)定性;
5)光譜帶寬(靈敏度,分辨力):指一個(gè)尖峰光譜帶通過單色器出狹縫時(shí),在檢測器上所檢測到的能量半寬度,用波長單位nm表示,從另一個(gè)角度理解這一概念會(huì)更通俗易懂:首先,單色器出狹縫不僅僅代表著狹縫的物理尺寸或幾何尺寸,他還代表著光學(xué)意義,這就是光譜帶寬,我們知道,來自單色器的光線不全是單一波長的光,而是一個(gè)狹窄的按波長大小順序排列的光譜帶,這一光譜帶包含波長的多少,用光譜帶寬來表示。光譜帶寬直接反應(yīng)的是從單色器出來的光的單色性的好壞程度。該指標(biāo)與儀器的分辨力和靈敏度很相似,但又有所不同,他們從不同的側(cè)面反應(yīng)光度計(jì)性能的好壞。分辨力是指儀器分辨兩相鄰波長大小的能力,靈敏度是指在做低濃度測量時(shí),當(dāng)濃度改變一個(gè)單位時(shí)在檢測器上所引起信號(hào)的變化量,它受校正曲線(標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為橫軸,吸光度為縱軸)和儀器本身精密度的限制。兩種測量方法精密度相同時(shí),校正曲線斜率越大越靈敏,而斜率相等時(shí),精密度越高靈敏度越好。需要指出的是,為了得到準(zhǔn)確的測試結(jié)果,儀器的光譜帶寬(SpectralBandwith簡稱SBW)和分析樣品的自然帶寬(NaturalBandwidth 簡稱NBW)之比應(yīng)小于0.1 , 這樣可以得到99.5% 以上的測量準(zhǔn)確度。
6)雜散光:雜散光是非選擇波長的光照射到檢測器上產(chǎn)生的信號(hào)。它是光度計(jì)分析誤差的一個(gè)重要來源,雜散光大會(huì)限制高濃度溶液分析的準(zhǔn)確性。雜散光用T%表示;
7)光度范圍:指光度計(jì)在滿足各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)下的測試范圍,用A或T表示;
8)光度準(zhǔn)確度:指多次測定的平均值與真實(shí)值符合的程度;檢查光度準(zhǔn)確度,通常是利用經(jīng)過仔細(xì)反復(fù)測量的中性濾光片作為標(biāo)準(zhǔn)光度片來檢測的。中性濾光片是一種對(duì)一定波長范圍內(nèi)的光具有幾乎相同的透射比(或吸光度)的濾光片,利用它對(duì)波長變化及帶寬變化不敏感的特性,來檢查儀器的光度準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

9)光度重復(fù)性:指在相同的條件下進(jìn)行多次平行測定,各平行測定結(jié)果之間的符合程度;
10)噪聲:指儀器檢測到的非有用信號(hào)的總和,它是相對(duì)信號(hào)而言的。通常,分光光度計(jì)中的噪聲有兩個(gè)來源,一是來自于光源,二是來自于儀器內(nèi)部固有的電
子噪聲,比如:電源,放大器,AD轉(zhuǎn)換器等。要減少噪聲,提高信噪比,必須有一個(gè)良好的電氣設(shè)計(jì)。噪聲影響低濃度測試下的測量重復(fù)性,也影響測試準(zhǔn)確度。噪聲可通過多次測量后取平均值部分消除;
11)飄移:指儀器隨時(shí)間推移偏離起始值的程度。它取決于光源的穩(wěn)定性,電氣器件的穩(wěn)定性等。對(duì)單光束儀器而言,開機(jī)預(yù)熱時(shí)間長短對(duì)漂移有很大影響。
12)基線平直度:指全波長范圍內(nèi)儀器噪聲的分布。
3、用途
可供物理學(xué)、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥物學(xué)、地質(zhì)學(xué)等學(xué)科進(jìn)行科學(xué)研究,是廣泛應(yīng)用于化工、藥品、生化、冶金、輕工、材料、環(huán)保、醫(yī)學(xué)化驗(yàn)等行業(yè)及分析行業(yè)中最重要的質(zhì)量控制儀器之一,是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的儀器。

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