【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：銅綠假單胞菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit forPseudo- monas aeruginosa
【包裝規(guī)格】24測試/盒
【產(chǎn)品編號】KJD01L
【產(chǎn)品簡介】
本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于包裝飲用水等水體中銅綠假單胞菌的微生物檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。
【檢測原理】
利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的BstDNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進行鏈置換擴增反應，實現(xiàn)在恒溫條件下（60-65℃）進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。
【產(chǎn)品特點】
1.快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在1 h內(nèi)完成；
2.特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設(shè)計多條引物，保證擴增反應的高度特異性；
3.靈敏度高：檢驗限達到8 CFU/Test；
4.判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。
【產(chǎn)品組分】
組分名稱 | 規(guī)格×數(shù)量 |
檢測試劑（凍干） | 3排× 8管 |
復溶液 | 650 μL × 1管 |
陽性對照（凍干） | 1管 |
陰性對照（凍干） | 1管 |
裂解液 | 1 mL × 1管 |
顯色指示劑 | 80 μL×1管 |
超純水 | 1 mL×1管 |
說明書 | 1份 |
【儲存條件與保質(zhì)期】
2~8℃條件下儲存，有效期為12個月
【適用儀器】
1.PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
2.高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。
【樣品富集】
1.樣品前處理：取250 mL待檢水樣進行抽濾，后將濾膜置于100 mL含銅綠假單胞菌增菌肉湯中，前增菌8-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。
2.適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
3.待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應該超過24 h；利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。
【使用指南】
1.樣品前處理
A.樣品增菌液模板DNA的制備：
a)在檢測包裝飲用水等水體中的銅綠假單胞菌時，吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清；
b)加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。
c)12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
B.可疑菌落模板DNA的制備：
挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。
2.陰、陽性對照和干粉試劑復溶
A.陰、陽性對照復溶
使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
B.干粉試劑復溶
取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照），每管加入20 μL復溶液，溶解后待用。
3.擴增反應
A.打開能夠提供恒溫條件的儀器，設(shè)置到64℃待用；
B.向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL；
C.向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子；
D.將所有的反應管置于恒溫儀器中，反應50 min。
4.結(jié)果判讀
反應結(jié)束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
