緩沖液的離子強(qiáng)度
溶液的離子強(qiáng)度(Ion intensity)是指溶液中各離子的摩爾濃度與離子價(jià)數(shù)平方的積的總和的1/2.帶電顆粒的遷移率與離子強(qiáng)度的平方根成反比.低離子強(qiáng)度時(shí),遷移率快,但離子強(qiáng)度過低,*蘇州金屬噴涂|高溫金屬噴漆加工|無(wú)塵室烤漆廠緩沖液的緩沖容量小,不易維持pH恒定.高離子強(qiáng)度時(shí),遷移率慢,但電泳譜帶要比低離子強(qiáng)度時(shí)細(xì)窄.通常溶液的離子強(qiáng)度在0.02～0.2之間.
I=1/2∑CiZi2 (I:離子強(qiáng)度;Ci:離子的摩爾濃度;Zi:離子價(jià)數(shù). )
0.154M NaCl溶液的離子強(qiáng)度為:
I= 1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154
0.015M Na2SO4溶液的離子強(qiáng)度為:
I= 1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045
3. 電場(chǎng)強(qiáng)度
電場(chǎng)強(qiáng)度(電勢(shì)梯度Electric field intensity)是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度).電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳速度起著正比作用,電場(chǎng)強(qiáng)度越高,帶電顆粒移動(dòng)速度越快.根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,電泳可分為兩種:一種是高壓電泳,所用電壓在500～1000V或更高.由于電壓高,電泳時(shí)間短(有的樣品需數(shù)分鐘),適用于低分子化合物的分離,如氨基酸,無(wú)機(jī)離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等.因電壓高,產(chǎn)熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質(zhì)等物質(zhì)的變性而不能分離,*蘇州金屬噴涂|高溫金屬噴漆加工|無(wú)塵室烤漆廠還因發(fā)熱引起緩沖液中水分蒸發(fā)過多,使支持物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強(qiáng)度增加,以及引起虹吸現(xiàn)象(電泳槽內(nèi)液被吸到支持物上)等,都會(huì)影響物質(zhì)的分離.另一種為常壓電泳,產(chǎn)熱量小,室溫在10～25℃分離蛋白質(zhì)標(biāo)本是不被破壞的,無(wú)需冷卻裝置,一般分離時(shí)間長(zhǎng).
4. 電滲現(xiàn)象
在電場(chǎng)中液體對(duì)于一個(gè)固體的固定相相對(duì)移動(dòng)稱為電滲.在有載體的電泳中,影響電泳移動(dòng)的一個(gè)重要因素是電滲.zui常遇到的情況是γ-球蛋白,由原點(diǎn)向負(fù)極移動(dòng),這就是電滲作用所引起的倒移現(xiàn)象.產(chǎn)生電滲現(xiàn)象的原因是載體中常含有可電離的基團(tuán),如濾紙中含有羥基而帶負(fù)電荷,與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷,液體便向負(fù)極移動(dòng).由于電滲現(xiàn)象往往與電泳同時(shí)存在,所以帶電粒子的移動(dòng)距離也受電滲影響;如電泳方向與電滲相反,則實(shí)際電泳的距離等于電泳距離加上電滲的距離.瓊脂中含有瓊脂果膠,,其中含有較多的硫酸根,所以在瓊脂電泳時(shí)電滲現(xiàn)象很明顯,許多球蛋白均向負(fù)極移動(dòng).除去了瓊脂果膠后的瓊脂糖用作凝膠電泳時(shí),電滲大為減弱.電滲所造成的移動(dòng)距離可用不帶

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